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点成案例| BE-Gradient 微流控芯片用于胶质母细胞瘤的研究

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研究快速导览

背景
胶质母细胞瘤(GBM〉是最致命的肿瘤类型之一。在这些肿瘤中,高细胞区被命名为假性细胞区,并被推测为胶质母细胞瘤细胞迁移的波。这些细胞的"波浪"被认为是由肿瘤引起的血管闭塞所造成的氧气和营养物质的消耗所诱发的。虽然这些结构在GBM肿瘤中的普遍存在表明,它们可能在胶质母细胞瘤的扩散和入侵中发挥了重要作用,但在体外重新创造这些结构仍然是一个挑战。

方法
西班牙萨拉戈萨大学通过采用先进的体外细胞培养装置——BE-Gradient 微流控芯片,模拟了假性细胞区形成的动态过程。将U-251 MG细胞嵌入微流控芯片的胶原水凝胶中。通过控制介质在横向微通道的流动,模仿和控制与这种疾病相关的血管阻塞事件。

结果
通过使用这个新的系统,证明营养和氧气的缺乏会引发一个强烈的迁移过程,导致体外假紫斑的产生。这些结果验证了假性细胞区的假说,并显示出与缺氧驱动生物学模型的出色一致性。

本研究有效的证明了BE-Gradient 微流控芯片作为先进的体外培养装置,能够很好的模拟在肿瘤演变过程中营养和氧气的化学梯度变化。

下面让我们了解基于BE-Gradient 微流控芯片更多的实验效果。

BE-Gradient 微流控芯片模拟化学梯度变化的可能性展示(方案之一):

图1 BE-Gradient 微流控芯片模拟营养和氧气的缺乏区域(I)和富集区域(II)的示意图

微流控芯片细胞长期体外存活能力展示:

图2 在9天后,U-251细胞在微流控芯片中的存活显示,活细胞(用1μg/ml的钙素标记)显示为绿色,死细胞显示为红色(用4μg/ml的碘化丙啶标记)。白色虚线划定了微型装置柱(50x100 µm)。细胞在1.5mg/ml胶原水凝胶内以400万细胞/ml的速度培养

假性细胞区形成的动态过程展示:

图3 在限定条件下形成假性细胞区过程 将400万cells/ml的U-251置于1.5mg/ml的胶原水凝胶中,在微型装置内培养。在不受限制的条件下,每天更换一次培养基,并在3天(A)、6天(B)和9天(C)使用钙黄素(绿色)和碘化丙啶(红色)评估细胞的活力。为了模拟受阻的情况,只让介质通过右侧微通道流动,并在3(D)、6(E)和9(F)天评估细胞活力。白色虚线划定了微装置柱(50x100 µm)的界限。图表显示了在3天(G)、6天(H)和9天(I),在受阻和不受阻的情况下,整个微室正交视图的荧光强度。图中的边界位置由灰色虚线划定。比例尺为200μm。 图4 假性细胞区形成期间的细胞形状。在不受限制(A)或受阻(B)的条件下培养5天后,拍摄微室的共聚焦图像。(C)分析了假性细胞区后部和前部的细胞形状,并与无限制条件下的同一区域进行比较;(D) 在受阻条件下,假性细胞区后部的方向性。(E) 石蜡包埋的GBM样本的苏木精和伊红染色。(F) 患者样本中假顶点后部和前部的细胞核长宽比;比例尺为200µm。

参考文献:
[1]Jose, et al. “Glioblastoma on a microfluidic chip: Generating pseudopalisades and enhancing aggressiveness through blood vessel obstruction events.” Neuro Oncology (2017).

Be-Gradient的其他应用:
Be-Gradient 由一个中央室(模拟细胞培养)和两条包含 3 个通向中心室的横向通道(模拟血管)组成。用于模仿体外的细胞培养。它可以在化学梯度下进行3D或2D细胞培养。由于其使用的聚合物具有一定的光学透明度,所以可以搭载显微镜、荧光显微镜和共焦显微镜辅助观测。
3D 细胞培养:首先将细胞混合在液相水凝胶中,然后将它们引流至中央室中。水凝胶聚合完成后,通过横向通道灌注具有不同浓度化合物的培养基,并实时监测效果。
2D 细胞培养:适用于贴壁细胞,不仅可以在中央室中检测,也可以在横向通道中培养。
应用领域:细胞/球状体入侵和迁移、血管新生、转移、血管生成、趋化、缺血、细胞分化或氧化压力、微型器件内的坏死核心生成、葡萄糖梯度实验。

如您有需要,请联系我们info@dianchengbio.com。


http://www.taodudu.cc/news/show-8381723.html

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